免疫組化檢測常用技巧事項
免疫組化，即免疫組織化學(xué)檢測，是病理診斷中一種常用的檢測手段。即對送檢的標本進行切片、染色，進而根據(jù)化學(xué)反應(yīng)使標記抗體的顯色劑顯色，以此來確定組織細胞內(nèi)的抗原，對其進行定位、定性及定量的研究。在免疫組化中，要想不出現(xiàn)無染色、高背景、非特異性染色等問題，取得滿意的實驗結(jié)果。檢測常見注意事項及小技巧總結(jié)如下：
1、組織脫水，透明 ：時間不能太長，否則在切片時容易碎片，切不完整。
2 、切片時展片： 有些組織在切片后難以在水中展開，這時可適當?shù)卦谒屑尤霂椎我掖肌?br />
3、烤片： 60℃ 30分鐘或37℃過夜，溫度太高或時間太長，抗原容易丟失。
4、蠟塊及切片的保存： 最好在4℃保存。
5、脫片問題 ： Poly-L-Lysine(多聚賴氨酸)為目前免疫組化 染色工作中最常用的一種防脫片劑，6ml的多聚賴氨酸溶液可按1:10稀釋成60ml的工作液，適合于需要酶消化、微波、高溫高壓的防脫片處理。如不行，可用雙重處理（APES和Poly-L-Lysine）的切片。在以上兩種條件都行不通的情況下，可用如下方法：切片在脫蠟前，放在APES 1：50 丙酮溶液中浸泡3分鐘，晾干，即可進行下一步。
6、抗體稀釋： 應(yīng)遵循“現(xiàn)用現(xiàn)配”的原則，對于PBS稀釋的抗體一定要當天使用。
7、背景高： 在抗體濃度、反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度等合適的條件下，如果背景依舊高，可采用含1‰ Tween20的PBS洗，特別是在顯色之前要多洗。
8、返藍： 在蘇木素復(fù)染后，可用堿性緩沖液（如PBS）或Na2HPO4的飽和溶液返藍。
9、顯色： 一定要在顯微鏡下觀察，注意控制背景。
10、在整個操作過程中，切片千萬不能干燥，否則會有非特異性染色。
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