PCR實驗出現(xiàn)假陽性特別應(yīng)注意操作

 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction,PCR），是用DNA聚合酶在體外對特定的DNA片段進行快速擴增的方法。該方法特異性高、敏感性強、操作簡單、快速，不通過活細胞，在數(shù)小時內(nèi)可使幾個拷貝的模板序列甚至一個DNA分子擴增10~109倍，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用到分子生物學(xué)研究的各個領(lǐng)域。

PCR實驗出現(xiàn)假陽性特別警示以下操作：

PCR只需幾個DNA分子做模板就可大量擴增，應(yīng)注意防止反應(yīng)體系被少量DNA模板污染和交叉污染，這是造成假陽性最大的可能。

1. 使用PCR室前認真洗凈手，操作應(yīng)戴手套并勤于更換。

2. 成套試劑，小量分裝，專一保存，防止他用。配制試劑用新器具，用后做一次性處理。

3. 使用完后切記開紫外15~30min，尤其是配液室；試驗完畢要收拾臺面，這一點對PCR試驗來說尤其重要，因為試驗垃圾可能是其他人的污染源，即使不是，未棄的垃圾易成為空氣中可能存在的DNA氣溶膠的載體，而造成污染。

4. 試劑管用前先瞬時離心(10s)，使液體沉于管底，減少污染手套與加樣器的機會。

5. 加入模板切忌噴霧污染，在吸取液體時，盡量避免用力過快吸取。避免反應(yīng)成分或模板噴到移液器上，污染移液器和環(huán)境。所有非即用管都應(yīng)蓋嚴，加模板DNA后應(yīng)更換手套。

6. 準(zhǔn)確吸取各反應(yīng)成分，配反應(yīng)液時要盡量避免1~2μl量加入，避免配單個20μl反應(yīng)體系。濃度高的液體在應(yīng)用之前稀釋至適當(dāng)濃度，然后再加入反應(yīng)體系中。做多管PCR反應(yīng)時首先將除模板之外的其他成分混合一起,然后再分成單個PCR反應(yīng)管中，這樣，加入各成分的量比較準(zhǔn)確。

7. 電泳時注意事項電泳上樣時，避免PCR產(chǎn)物漂移到其他孔而影響結(jié)果判定。特別要注意EB為強致癌物質(zhì)，必須戴手套，謹慎操作，搖動時不要外濺。