ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)樣品血清介紹

   酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯y(tǒng)i烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。它是應(yīng)用最多的一種免疫酶技術(shù)。ELISA試劑盒（ELISAKits）已成為藥物和植物病理學(xué)研究中的常用診斷工具，是檢測(cè)組織提取液、血清和細(xì)胞培養(yǎng)液中目標(biāo)抗體/抗原的理想工具，也是重要的質(zhì)量控制手段。
  通常我們可用于ELISA檢測(cè)的樣本是有多種類型的，如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等，不同類型的檢測(cè)樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證ELISA檢測(cè)的正確性和準(zhǔn)確性的第一步，下面介紹一下血清樣本的處理方法。血清是最常用于ELISA檢測(cè)的一類樣本，處理也比較簡(jiǎn)單。
用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜，使血清析出。（最好將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。）4℃ 1000×g離心20分鐘，仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。
  采血過(guò)程中應(yīng)避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放具有過(guò)氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測(cè)中會(huì)有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測(cè)的不準(zhǔn)確性。同時(shí)也應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榫w內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測(cè)的假陽(yáng)性。

ELISA 實(shí)驗(yàn)中血清的采集、處理和保存：
1、真空采血針采集 2ml 新鮮血液，加入無(wú)菌試管中；
2、采血后室溫靜置 1 小時(shí)；
3、將采集血液用離心機(jī) 4℃，2500rpm 離心 10min，，將離心好的勻漿留上清，棄下面沉淀。
4、取上清。 分裝凍存?zhèn)溆茫?br /> 2-8℃下，可放置保存 24-48 小時(shí)；
-20℃下，可放置保存 1 個(gè)月；
-70℃下，可放置保存 6 個(gè)月；
5、根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種 ELISA 測(cè)定。
大部分 ELISA 檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，以 HRP 為標(biāo)記的 ELISA 測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。此外還應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榫w中可能含有含有內(nèi)源性 HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。血清標(biāo)本宜在新鮮 時(shí)檢測(cè)。如在冰箱中保存過(guò)久，其中的可發(fā)生聚合，間接法 ELISA 中可使本底加深。