ELISA檢測過程對照設置

    ELISA檢測，按照試劑說明書要求，每次試驗、每塊扳上都要設置以下3項對照和用途：  

1．空白對照：

僅用稀釋液代替檢測樣本、用以觀測最終反應的顯色“本底"、并用于酶標儀消除、扣除“本底"，即：以本底為“零"讀取陽性、陰性對照孔和樣本檢測孔的吸光值（A）；或者，在計算陰性對照均值（NCx）、陽性對照均值（PCx）、樣本讀數(shù)的S/C.O.值時減去空白對照的本底吸光值。早年的酶標儀無自動扣除空白對照孔讀數(shù)功能，這種酶標議現(xiàn)已淘汰不用了，寫上這段話的意思是補充說明設置空白對照的用途。空白孔具體如何讀取讀數(shù)，則依照說明書操作。例如，生物梅里埃中國有限公司的中文版《人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）使用說明書》上提示：以空氣讀空白（不放板架和板條），在450nm（單波長）、或450nm和620—700mn（底物是TMB）參考波長進行讀數(shù)。
2．陰性對照（品）：
（1）、陰性對照（品）的概念與要求：

所謂陰性對照（品），應當是本項檢測試驗中采用與待撿物（樣品、人用試劑就是人的血清等）具有同源性和同質(zhì)性，又不含有待檢物質(zhì)，并能客觀比較和鑒別處理因素（血清免疫學試驗中有特異性抗原與抗體反應）之間的差異。因此，用動物血清或其制品（如牛血清白蛋白等）代替陰性人血清作為對照品，從理論和實踐上都是不可取的，弊端甚多，無須細述。注意：據(jù)我所知，國產(chǎn)ELISA試劑中，有的廠牌是用動物血清制品稀釋配置、或與部分人血清混合配置的；  其二，陰性對照讀數(shù)，并非是“越低越好"。NCx值接近0.00X水平，這是假象！試想一下，真正采用“陰性人血清"的陰性對照品，NCx值會如此之低嗎？舉個例子，雅培乙肝六項EIA試劑的NCx值，分別為：0.010（HBsAg）、0.027（抗—HBs）、0.035（HBeAg）、1.083（抗—HBe）、1.065（抗—HBc）、0.045（抗HBc-IgM）。生物梅里埃的HIV試劑NCx是0.091。辨別試劑NCx值是否合理的一個很簡單的方法，只要對比大量陰性樣本的實際讀數(shù)就“一目了然"啦！

（2）、陰性對照（品）分為兩類
一是代表受檢人血清中并不含有、或方法學靈敏度未能檢出的待檢物的基準水平，并且是結(jié)果判斷值（Cut off）計算式中決定“是"（陽性）、或“否"（陰性）的唯 1可變值。陰性對照值高，導致假陰性；反之，導致假陽性。如：HBsAg、HBeAg、抗—HBc等。二是陰性對照設置，在方法學上要求加入指示性定量標準品，如中和劑HBeAg，定量HBcAg等，用以檢測抗—HBe、抗—HBc?；蛘?，選取代表平均水平的正常人血清用作陰性對照，如檢測抗—HBc IgM。此類Cut off 值計算時，多數(shù)均包括陰性和陽性對照值2個可變值。

3．陽性對照（品）：
（1）、陽性對照（品）的概念與要求：

同陰性對照（品），只是采用“精選"的含有待檢物質(zhì)的人血清制備而成。所謂“精選"，就是把收集的陽性人血清經(jīng)過數(shù)種試驗進行“篩試"、把含有“干擾性物質(zhì)"的血清剔除、不用，以避免出現(xiàn)“假陽性"干擾試驗結(jié)果。  
（2）、陽性對照（品）設置，也可區(qū)分為兩種類型與用途：
一是陽性對照主要用于評價該項試驗結(jié)果是否有效和試驗結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性。而所設的陽性對照的測量值不列入Cut off值計算、但是不可不做。如HBsAg、抗—HBs、HBeAg等。
二是陽性對照的設置，不僅用于評價試驗結(jié)果是否有效和試驗結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性，而且計入Cut off的計算。此時的Cut off值的含義是代表該標志物在健康（正常）人群中正常值范圍的上限。待檢樣本檢測值超過該上限（Cut off）時表示有診斷意義。例如抗—HBe、抗—HBc、抗—HBc IgM等。