實(shí)驗(yàn)推送：原代細(xì)胞提取具體過(guò)程

原代細(xì)胞(primary cell)是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞，稱(chēng)為原代細(xì)胞。一般認(rèn)為，培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以?xún)?nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱(chēng)為原代細(xì)胞培養(yǎng)。

下面來(lái)了解原代細(xì)胞的提取的整個(gè)操作過(guò)程：

1. 整個(gè)操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺(tái)下進(jìn)行，所有的器件要高壓消毒。

2. 依據(jù)BALB/c小鼠的體重，用10ml/kg3%濃度的麻醉；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi)，這一步不只能夠消毒，也能夠讓小鼠體毛浸濕，后續(xù)剃去皮毛的時(shí)分不會(huì)沾到剪刀或安排上。

3. 用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟，裝有PBS的注射器刺進(jìn)心尖，同時(shí)在右心耳處剪開(kāi)一個(gè)小口，緩慢推進(jìn)注射器，隨著心臟的跳動(dòng)，將體內(nèi)的血液沖洗出來(lái)。

4. 取出小鼠的肺部安排，將肺安排切成小米粒樣的巨細(xì)，置于預(yù)冷的HBSS中反復(fù)沖洗幾回。

5. 將小米粒巨細(xì)的肺安排置于培育瓶中（培育瓶前一天用1%明膠溶液包被培育面，4度過(guò)夜，小鼠處理前，將培育瓶放置培育箱中，使其溫度恢復(fù)至37度），置于培育箱37度的環(huán)境下，消化4個(gè)小時(shí)。

6. 消化4小時(shí)后，參加RPMI1640培育基（有10%血清、1%雙抗、1%內(nèi)皮細(xì)胞成長(zhǎng)因子）10ml（*增加培育基，能夠是正常培育時(shí)的2倍量），持續(xù)培育24小時(shí)（持續(xù)培育的時(shí)刻可依據(jù)細(xì)胞貼壁狀況適當(dāng)調(diào)整）。

7. 24小時(shí)后，取出肺安排，鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，換液。

8. 原代細(xì)胞的提取和培育是很慢的過(guò)程，一般需比及24小時(shí)后，才能在鏡下看到些許細(xì)胞群，一周到兩周后才會(huì)看到鵝卵石樣的擺放狀況。

9. 原代細(xì)胞2-3天換液一次，由于內(nèi)皮細(xì)胞成長(zhǎng)形成單層時(shí)，會(huì)出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象。所以，內(nèi)皮細(xì)胞成長(zhǎng)挨近單層時(shí)就能夠傳代了，不要比及長(zhǎng)得非常滿(mǎn)。