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細(xì)胞培養(yǎng)方式及注意事項(xiàng)

細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個生物工程技術(shù),還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說,細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞,細(xì)胞培養(yǎng)都是一個必不可少的過程,細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)模克隆。

  細(xì)胞培養(yǎng)是指從體內(nèi)組織取出細(xì)胞膜,模擬體內(nèi)生存環(huán)境,在無菌、適當(dāng)溫度及酸堿度和一定營養(yǎng)條件下,使其生長繁殖并維持結(jié)構(gòu)和功能的一種培養(yǎng)技術(shù)。目前細(xì)胞培養(yǎng)方式主要包括以下三種:
1、貼壁培養(yǎng)
貼壁培養(yǎng)主要適用于貼壁依賴性細(xì)胞。此類需要相互依賴,需貼附于不起化學(xué)作用的物質(zhì)(玻璃或塑料等無活性物質(zhì))的表面生長、生存和維持,并終在附著面生長至單層,鋪滿平面時便會發(fā)生接觸抑制。大多數(shù)動物細(xì)胞,包括非淋巴組織的細(xì)胞和許多異倍體體系的細(xì)胞屬于這一類型,他們需要附著于適量正電荷的固體或半固體的表面勝仗。
2、懸浮培養(yǎng)
來源于血液、淋巴組織的細(xì)胞,及許多腫瘤細(xì)胞(包括雜交瘤細(xì)胞)和某些轉(zhuǎn)化細(xì)胞等屬于懸浮培養(yǎng)型細(xì)胞,細(xì)胞為非貼壁依賴性細(xì)胞,無需支撐面,細(xì)胞或細(xì)胞聚集體懸浮于液體培養(yǎng)基中增殖。懸浮培養(yǎng)是大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)的理想方式,可采用類似于微生物的方法進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。
3固定化培養(yǎng)
動物細(xì)胞較微生物脆弱,易受剪切力等的影響,而細(xì)胞固定化技術(shù)可較好的保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械力及環(huán)境變化的影響,提高細(xì)胞的耐受力,促使細(xì)胞高密度培養(yǎng),提高目的產(chǎn)物的產(chǎn)率。在傳統(tǒng)的固定化酶技術(shù)中,常采用戊2醛、聚丙烯酰胺、聚氨酯等作為固定化細(xì)胞載體。但在動物細(xì)胞培養(yǎng)中,一般使用較溫和的固定方法,如吸附、包埋、中空纖維或膠囊化等,具有剪切力低、傳遞效果好和抗污染能力強(qiáng)、細(xì)胞生長密度高、產(chǎn)物易于收集和分離純化等特點(diǎn)。
由于所培養(yǎng)的細(xì)胞的不同,固定化培養(yǎng)的方式也有不同,一般對于貼壁依賴性細(xì)胞通常采用膠原包埋,而對于非貼壁依賴性細(xì)胞則常用海藻酸鈣包埋。常用的細(xì)胞固定化的方法主要有吸附、共價貼附、離子/共價交聯(lián)、包埋和微囊化等。

防止細(xì)胞培養(yǎng)出現(xiàn)污染的方法如下:
1、從培養(yǎng)箱取放細(xì)胞前,用酒精清潔雙手(或手套),盡量縮短開門時間和減少開門次數(shù)。培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱前,用酒精消毒表面,并稍等至酒精揮發(fā)后再放入,以免培養(yǎng)箱內(nèi)滯留過多乙醇蒸氣。
2、操作的時候防護(hù)服、口罩、手套缺一不可。操作前,準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)所需物品,以減少走動,物品需有序擺放在超凈臺觸手可及的地方,同時空留足夠操作空間。
3、操作時,試劑不用盡量及時蓋上蓋子,移至操作區(qū)外圍,盡量不要從開口容器上經(jīng)過。
4、使用移液槍時,將容器傾斜以便于移液,切勿將槍桿碰觸瓶口及內(nèi)壁。一旦發(fā)生倒吸情況,要及時用酒精棉球擦拭,以免液體殘留導(dǎo)致細(xì)菌滋生。
5、凍存細(xì)胞時凍存管蓋子需擰緊。復(fù)蘇細(xì)胞時,從液氮罐取出凍存管,輕擰蓋子,以確認(rèn)蓋子是否擰緊。

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