ELISA實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)顯色淡現(xiàn)象分析

        ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。在檢測(cè)時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應(yīng)。洗滌后加入酶標(biāo)記的抗體，通過反應(yīng)結(jié)合在固相載體上。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

ELISA實(shí)驗(yàn)過程出現(xiàn)顯色淡的現(xiàn)象，下面對(duì)其的原因及解決方案介紹：

    原因一：試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長，溫度太高。

    解決方案：盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間，夏季應(yīng)放冰塊降溫。

    原因二：試劑盒未充分平衡。

    解決方案：試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）。

    原因三：培養(yǎng)箱溫度不足37℃。

    解決方案：注意培養(yǎng)箱溫度，放入反應(yīng)板后盡量減少開啟次數(shù)以免影響溫度恒定，非隔水式培養(yǎng)箱尤其應(yīng)注意。

    原因四：保溫時(shí)間不足。

    解決方案：校正定時(shí)鐘準(zhǔn)確定時(shí)。

    原因五：洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過長、洗滌次數(shù)增加。

    解決方案：按說明書要求保留洗滌時(shí)間，準(zhǔn)確記住洗滌次數(shù)。

    原因六：移液器吸液量不足，吸嘴內(nèi)壁掛水太多或內(nèi)壁不清潔。

    解決方案：校正移液器，吸嘴要配套，裝吸嘴時(shí)要緊密，吸嘴內(nèi)壁要清潔，一次性使用。

    原因七：蒸餾水水質(zhì)有問題。

    解決方案：使用新鮮合格的蒸餾。

    原因八：底物作用時(shí)間不足。

    解決方案：準(zhǔn)確定時(shí)。    

    顯色一定要控制時(shí)間，根據(jù)試劑盒說明操作即可。一般來說，顯色時(shí)間過短，結(jié)果偏低；顯色時(shí)間過長，空白增高或者非特異性顯色增加。