生化試劑盒常見問題解析

1. 生化試劑盒的測定原理？
生化試劑盒通過化學反應/酶促反應或物質(zhì)結(jié)構(gòu)特點測定樣本中物質(zhì)含量或酶活；所用儀器一般為分光光度計和酶標儀，兩者的測定原理都是 朗伯比耳定律: A=kbc，即當適當波長的一束平行單色光照射固定濃度均勻溶液時，其吸光度與光通過的液層厚度成正比。土壤、水質(zhì)、動植物組織、血清、細胞細菌、食品等 樣本均可以進行測定。

2. 如何選擇不同規(guī)格的試劑盒？
首先根據(jù)本實驗的實際情況選擇，實驗室有酶標儀的且有該檢測波長的可以選擇微量法試劑盒；實驗室有分光光度計的，且有相應規(guī)格的比色皿既 可以選擇常量法也可選擇微量法試劑盒。建議購買前先閱讀官網(wǎng)的說明書，對其中自備的儀器和試劑進行確認。

3. 收到試劑盒后如何保存？
如果收到試劑盒，暫時不用，可按照外包裝上指示的溫度統(tǒng)一保存；拆開包裝后，請按照每個試劑的保存溫度進行保存，有些試劑忌反復凍融； 有些試劑為粉劑，溶解之后性質(zhì)不穩(wěn)定。

4. 試劑盒的有效期是多長？
一般生化試劑盒有效期為6個月，也有特殊貨號生化試劑盒有效期為1年；具體以實際收到貨物的標簽信息為準。

5. 收到試劑盒后應該從哪一步做起？
強烈建議客戶先拿出2-3個預期結(jié)果差別較大的樣本做預實驗。在實驗的過程中，首先將試劑盒中的說明書通讀一遍， 檢查試劑盒中各成分的量與說明書符不符合，溶解或使部分試劑回復至室溫，然后處理樣本，樣本提取完成后，再溶解一些粉劑，開始實驗。

6. 買了多個試劑盒，樣本只有很少可以只用一種提取液提取嗎？
一般同一個系列的試劑盒中，酶活測定的提取液類似，含量測定的提取液類似。但具體的請具體查詢。

7. 待測樣本必須是鮮樣的嗎？冷凍樣本是否可以用？
新鮮樣本和冷凍樣本都可用于大多數(shù)指標的測定，有一些生理活性物質(zhì)容易降解，建議用新鮮樣本測定， 如輔酶Ⅰ、輔酶Ⅱ、谷胱甘肽、線粒體復合體等。冷凍樣本建議在-70℃或者液氮中保存。一般樣本在4度能都 保存一周，-20保存一個月，-80保存3個月

8. 土壤酶活性測定可以用鮮土嗎？
由于土壤顆粒大小不一致導致水分含量不一樣，且取樣量較少，為了保證測定的重復性，建議將鮮土風干并 過篩后取樣。若用鮮土測定，需保證樣本的顆粒大小一致水分含量相似，建議過40目篩后取樣，且同時測定 的樣本要保持一致，最好不要一組樣本用風干土，一組用鮮土，風干后的土樣在-20保存1個月測定大部分酶活 幾乎不會有損失；某些土壤的成分如硝態(tài)氮、銨態(tài)氮等在風干過程中會發(fā)生顯著變化，必須用新鮮樣品進行分析。

9. 樣本研磨的方法？
樣本研磨我們一般用到三種方法： 第一種：將研缽置于冰盒上勻漿即冰浴勻漿，在勻漿的過程中注意勻漿器浸于冰中，防止因為摩擦引起的溫度過高，提取液可以在勻漿過程中或者勻漿后加入。 第二種：用液氮勻漿，液氮研磨前將樣本洗凈，盡量剪成小塊，放入研缽中，加入液氮研磨，液氮揮散后盡快加入第二次液氮直至研磨成粉末狀，避免其過程中 反復凍融，同時要做好保護措施，防止凍傷手指。完成后將粉末收集到離心管中加入緩沖液。樣本可以提前稱量號也可研磨完后稱量。 第三種：使用勻漿機進行勻漿，將稱好的組織放入離心管中，加入適量提取液，加入鋼珠。并將模塊提前遇冷，按照機器指示進行操作。一般的動物組織用 該方法效果尚可，有些機器對植物組織的處理效果不好。

10. 測定前是如何調(diào)零？
使用分光光度計的用戶，用蒸餾水或相應的有機試劑直接調(diào)零。使用酶標儀的用戶，可以在一個孔里加入200μL的蒸餾水或去離子水，作為調(diào)零孔， 也可不用調(diào)零，后續(xù)計算中會有空白孔。

11. 樣本如何稀釋或濃縮？
樣本測定值若超出檢測范圍，可以將提取的上清液用提取液稀釋后重新測定。一般從高到低，按照2倍，5倍，10倍，20倍的順序，選擇一個合適的稀釋 倍數(shù)。樣本測定值若低于檢測范圍，可以提高樣本濃度，如稱取0.2g樣本加入1mL提取液勻漿，相當于將樣本濃縮2倍。

12. 如何保證測定溫度？
（1）根據(jù)說明書中指定測定溫度，提前打開保溫設(shè)備（如水浴鍋），設(shè)到指定溫度，在達到指定溫度后，把冷藏的試劑轉(zhuǎn)移到保溫設(shè)備中保溫10-30分鐘以上，以保證反應一開始，就在指定溫度中進行。

（2）對于擁有酶標儀的用戶，直接提前預熱，在達到設(shè)定溫度后，可以直接把預熱后的試劑，加入酶標板，然后開始反應。

（3）在保溫設(shè)備（水浴鍋和金屬浴，最好是前者）進行。注意提前對保溫設(shè)備進行預熱，達到設(shè)定溫度后再進行反應。但是僅適用于能夠終止的反應。

（4）對于瞬間完成的反應，或者對溫度不敏感的反應，為了提高重復性，最好在同一溫度下完成檢測。例如打開空調(diào)，設(shè)定在室溫，如25℃。 當然，所有控溫設(shè)備，都要進行預熱。

13. 試劑盒有哪些常見規(guī)格？
(1)50管的試劑盒，常量法試劑盒，用分光光度計檢測。1mL的比色皿檢測。

（2）100管的試劑盒，微量法試劑盒，用酶標儀（酶標板）或者分光光度計（0.25 mL比色皿）檢測。

14. 試劑盒規(guī)格中是什么意思？
（1）50T/48S：50T指能夠做50次測定，48S指可以測試48個樣品。如果每個樣品重復測定3次，那么只能測定16個樣品。其中有2次測定用于空白管或者 對照管。值得特別注意的是，50T/24S中由于每個樣品測定都需要做對照，因此能夠測定樣品的數(shù)量僅為8個（假設(shè)做3次重復） （2）100T/96S：100T指能夠做100次測定，96S指可以測定96個樣品，如果每個樣品重復測定3次，那么只能測定32個樣品。其中有4次測定用于空白管或 者對照管。 注意由于瓶璧和移液器吸附等，通常要比理論測定次數(shù)少1~3次。其它規(guī)格的含義依次類推。值得特別注意的是，100T/48S中由于每個樣品測 定都需要做對照，因此能夠測定樣品的數(shù)量僅為16個（假設(shè)做3次重復）。

15. 試劑盒中含有干粉的試劑應該怎么稀釋保存？
一般試劑為粉劑的，可能更多的考慮到配成溶液后的穩(wěn)定性差，如NADH，或者和其他試劑溶解在一起會在不同的溫度下有其他的化學反應如氯化錳。 -20℃保存的粉劑建議溶解后分裝保存，避免反復凍融。