PCR 實(shí)驗(yàn)室污染情況詳細(xì)分析

        PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，PCR是一種的生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)，是基因檢測(cè)的一種手段，具有高度敏感性、特異性、快速、簡(jiǎn)便等特點(diǎn)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用，不過正是由于它靈敏度極高，極微量的污染源都有可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的假陽性，因此所有的預(yù)防措施都會(huì)稍稍有所不同?！敢撞椴灰撞臁梗廴緛淼们臒o聲息，PCR 實(shí)驗(yàn)室污染具體分析如下：

一、PCR 實(shí)驗(yàn)室污染分類：

1、 樣本間交叉污染

主要是在采（?。拥倪^程中，由于取樣工具之間的交叉造成污染；或者在核酸提取的過程中，由于移液器、離心管等使用不當(dāng)導(dǎo)致的污染。

2、 PCR試劑污染

主要是在 PCR 組分試劑加樣過程中，由于移液器、容器、陰性對(duì)照及其它試劑被核酸模板或陽性對(duì)照污染。

3、 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染

這是 PCR 反應(yīng)中最主要最常見的污染問題。因?yàn)?PCR 產(chǎn)物拷貝量大，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于 PCR 檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限，所以極微量的 PCR 產(chǎn)物污染，就可形成假陽性。還有一種容易被忽視的污染，是能造成 PCR 產(chǎn)物污染形式的氣溶膠污染，而氣溶膠造成的污染是一個(gè)值得特別重視的問題。

4、 克隆質(zhì)粒污染

  在實(shí)驗(yàn)操作中會(huì)經(jīng)常用到陽性參考品，這些參考品大多數(shù)是由某些克隆質(zhì)粒制作而成的，質(zhì)粒在單位容積內(nèi)濃度高，不小心使用極易造成污染。 

二、實(shí)驗(yàn)室污染處理方法：

1.物料準(zhǔn)備

(1)購買噴壺（能夠噴出霧狀水汽的即可）；

(2)購買市面上有效氯消毒片，根據(jù)要求配置不同濃度的消毒液，或者購買成品次氯酸鈉消毒液配制合適濃度消毒水；

(3)購買核酸氣溶膠污染清除劑(DNA AWAYO®原液/MediClean⑧稀釋100倍)；

(4)無紡布/無塵紙等。

2.應(yīng)急處理方法

(1)清理廢液缸并且對(duì)廢液缸用有效氯含量為 2000 mg/L 消毒水浸泡消除核酸污染；

(2)用有效氯含量為 2000 mg/L 消毒水對(duì)移液槍進(jìn)行擦洗，關(guān)鍵部位為移液槍前端易污染部位，清潔干凈后用潔凈水再擦拭一遍；

(3)將離心管架、擴(kuò)增管架、擴(kuò)增管架底板、吸嘴盒及其他相關(guān)物品用有效氯含量為 500 mg/L 的消毒水浸泡 2 小時(shí)后，用清水沖洗干凈晾干后使用；

(4)對(duì)污染區(qū)域內(nèi)的設(shè)備如擴(kuò)增儀、全自動(dòng)提取儀等，使用核酸氣溶膠污染清除劑進(jìn)行反復(fù)處理；對(duì)生物安全柜等含有空氣過濾系統(tǒng)的設(shè)備，需更換過濾網(wǎng)；

(5)用有效氯含量為 500 mg/L 的消毒液對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)室（地板、墻面、天花板、門、窗戶等地方）進(jìn)行清潔，并且用用有效氯含量為 1000 mg/L 的消毒水對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行噴霧消毒（重點(diǎn)部位為操作區(qū)），有效降解空氣中的氣溶膠與附著在實(shí)驗(yàn)臺(tái)表面的核酸污染；同時(shí)加大通風(fēng)量（內(nèi)循環(huán)無用，盡可能外循環(huán)）；

(6)待污染區(qū)域及設(shè)備器件清理完成后，常用設(shè)備和操作臺(tái)面使用移動(dòng)紫外消毒車近距離輻照 1 小時(shí)；實(shí)驗(yàn)室內(nèi)則使用室內(nèi)紫外燈整晚輻照。

以上措施每日進(jìn)行，直至污染消除；步驟 (1) ~ (6) 必須堅(jiān)持每天進(jìn)行，確保消除實(shí)驗(yàn)室污染；

3.消除污染判定標(biāo)準(zhǔn)

設(shè)計(jì)陰性對(duì)照組，根據(jù)陰性對(duì)照確認(rèn)污染情況?？墒褂贸ㄩ_后隔夜放置操作區(qū)的陰性對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)（在單獨(dú)的實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證)，若連續(xù)三天陰性對(duì)照沒有起跳，則說明污染得到控制，可恢復(fù)正常實(shí)驗(yàn)。

污染，是 PCR 實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)假陽性、結(jié)果不可信、研發(fā)不可靠的重要推手。

在最初開展 PCR 實(shí)驗(yàn)室的時(shí)候，應(yīng)最大程度的降低可能出現(xiàn)的 PCR 污染或杜絕污染的出現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)室前期設(shè)計(jì)及日常實(shí)驗(yàn)室管理和操作中，就需要進(jìn)行合理的規(guī)劃以及嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室 SOP，把污染的可能性扼殺在搖籃中。