永生化表皮細(xì)胞培養(yǎng)方法

永生化表皮細(xì)胞類型:貼壁生長(zhǎng) 形態(tài):CM8-1培養(yǎng)液中，貼壁，上皮細(xì)胞樣，多角形 分離基物:該細(xì)胞源自一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚，角蛋白、角化細(xì)胞交聯(lián)外膜蛋白、中間絲相關(guān)蛋白陽(yáng)性。 提供形式:復(fù)蘇形式：T25培養(yǎng)瓶1瓶；或者凍存形式：2ml凍存管2支，干冰費(fèi)另計(jì)。 培養(yǎng)方法 培養(yǎng)基:90%MEM(EBSS)+10%FBS 傳代方法:將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，則吸除大部分胰酶，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約5min取出。傳代用12mL CM8-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)； 生長(zhǎng)條件:37℃，5%CO2，CM8-1培養(yǎng)液。CM8-1培養(yǎng)液：90%EMEM+10%FBS。EMEM：EMEM培養(yǎng)液。 存儲(chǔ)條件:凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過(guò)夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。