了解抗體的各種功能斷定
抗體的主要功能是與抗原(包括外來(lái)的和自身的)相結(jié)合,從而有效地清除侵入機(jī)體內(nèi)的微生物、寄生蟲(chóng)等異物,抗體(antibody)是一種應(yīng)答抗原產(chǎn)生的、可與抗原特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。每種抗體與特定的抗原決定基結(jié)合。這種結(jié)合可以使抗原失活,也可能無(wú)效但有時(shí)也會(huì)對(duì)機(jī)體造成病理性損害,如抗核抗體、抗雙鏈DNA抗體、抗甲狀腺球蛋白抗體等一些自身抗體的產(chǎn)生,對(duì)人體可造成危害。
1、抗體的特異性斷定
抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的辨認(rèn)才干。抗體的特異性高,它的辨認(rèn)才干就強(qiáng)。衡量特異性一般以交叉反應(yīng)率來(lái)標(biāo)明。交叉反應(yīng)率可用競(jìng)賽克制試驗(yàn)測(cè)定。以不同濃度抗原和近似抗原別離做競(jìng)賽克制曲線,核算各自的結(jié)合率,求出各安閑IC50時(shí)的濃度,并按公式核算交叉反應(yīng)率。
假如所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無(wú)窮大時(shí),標(biāo)明這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0,即該血清的特異性較好。
2、抗體的效價(jià)斷定
不管是用于確診仍是用于醫(yī)治,制備抗體的目的都是要求較價(jià)。不同的抗原制備的抗體,要求的效價(jià)紛歧。斷定效價(jià)的辦法很多,包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂分散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的斷定效價(jià)的辦法,以資比較。如制備抗抗體的效價(jià),一般就采用瓊脂分散試驗(yàn)來(lái)斷定。
3、抗體的親和力斷定
抗體的親和力是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的凹凸是由抗原分子的巨細(xì)、抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原抉擇簇之間立體構(gòu)型的合適度抉擇的。有助于保持抗原抗體復(fù)合物安穩(wěn)的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側(cè)鏈相反電荷基因的庫(kù)侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K標(biāo)明,K的單位是L/mol,一般K的范圍在108~1010/mol,也有多達(dá)1014/mol。抗體親和力的測(cè)定對(duì)抗體的挑選,確認(rèn)抗體的用途,驗(yàn)證抗體的均一性等均有重要意義。