影響細菌藥敏試驗三個因素

近年來，細菌感染性疾病嚴重威脅著人類的健康，抗生素的合理使用是治療和控制此類疾病的有效手段。但是世界各國面臨著感染菌的耐藥性明顯增多的威脅。用藥敏實驗進行藥物敏感度的測定，以便準確有效的利用藥物進行治療。但由于藥敏試驗要求比較嚴格，條件比較高，僅僅在大中專院?；蚩蒲袉挝挥袟l件的可以操作，一些養(yǎng)殖廠或一些門診難有條件進行藥敏試驗的操作。雖然新型抗菌藥物不斷出現(xiàn)，但是常見感染菌的耐藥性也在增強。有效而合理的抗生素治療依賴于準確的抗菌藥敏試驗。醫(yī)生越來越重視根據(jù)藥敏試驗的結(jié)果來選擇用藥，以避免用藥不當產(chǎn)生耐藥菌株。抗生素體外藥敏試驗結(jié)果的正確與否對抗生素的選擇至關(guān)重要。藥敏試驗的結(jié)果受到諸多因素的影響，如培養(yǎng)基、試紙片以及菌液的濃度等。

       1、試紙片

　　試紙片材質(zhì)的好壞，對藥物穩(wěn)定性和活性有很大影響。加工藥敏試紙片的試紙一般是使用加厚型的濾紙，雜質(zhì)少，對藥物保存無太大影響。然而，臨床中很多用的是普通紙，被水浸潤后會呈堿性，并且含有大量無機離子，因此使用普通紙加工的試紙片藥物有較大的影響。藥敏紙片的pH值一般要求為中性，這樣才適合藥的活度。藥敏紙片的厚度要求大約1mm，這樣才有利于細菌的生長和藥物的擴散速度。藥敏紙片的直徑在6．00～6．35mm之間，紙片的厚度和直徑大小都會影響藥敏試驗的結(jié)果。

　　含藥紙片的片間差和質(zhì)量好壞是做藥敏試驗的關(guān)鍵。一些藥敏紙片買來時就有抑菌環(huán)偏大或偏小的問題，紙片之間又存在很大的片間差。因此，紙片在用前必須檢驗其片間差和準確度，只有都達到標準要求后才能使用。同時要注意紙片的保存，因為有的紙片，如青霉素類，在保存中因為受潮濕環(huán)境的影響容易降低其藥物的活性。因此，紙片應(yīng)放低溫下(-10℃)保存，同時要避免潮濕，以保持抗菌藥物的活性。盛紙片小瓶自低溫處取出應(yīng)在室溫平衡至少10min后再打開，避免冷凝水影響藥效。

　　2、培養(yǎng)基

　　細菌藥敏試驗所用的培養(yǎng)基種類較多，多數(shù)情況下，采用WHO組織統(tǒng)一要求的M—H培養(yǎng)基，這種培養(yǎng)基中含有的低胸腺嘧啶是與磺胺類藥物競爭的物質(zhì)，因此進行的藥敏試驗效果較好。此外，還有適量的Ca2+、Mg2+，在培養(yǎng)基中起到觸媒的作用。但是，有些細菌對培養(yǎng)基中的成分有特殊的要求，特殊的菌要用特殊的培養(yǎng)基才能進行藥敏試驗。例如，流感嗜血桿菌的藥敏試驗培養(yǎng)基用HTM瓊脂；淋球菌的藥敏試驗培養(yǎng)基用加5％羊血的巧克力M—H瓊脂；肺炎鏈球菌的藥敏實驗用M—H瓊脂加5％的脫纖維羊血培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中還有適量的Ca2+、Mg2+，在培養(yǎng)基中起到溶酶的作用，其含量的變化，可影響氨基糖苷類和四環(huán)素對銅綠假單胞菌的試驗結(jié)果，含量過高，抑菌圈會變小，含量過低，抑菌圈會大得不可接受。

　　細菌藥敏試驗的培養(yǎng)基厚度大約為4mm，若培養(yǎng)基厚度大于4mm，會使細菌出現(xiàn)耐藥；若小于4mm，本應(yīng)耐藥的易出現(xiàn)敏感。所以，試驗時一定不要把藥敏紙片放在中央部位，而應(yīng)均勻地排布在平皿周圍的培養(yǎng)基上。制作藥敏試驗的培養(yǎng)基用水，主要是Ca2+、Mg2+、A13+等礦物質(zhì)離子，也在很大程度上影響著藥敏試驗的結(jié)果。

　　3 細菌

　　由于各種菌對藥物的敏感性不同，產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小不同，如果菌種不純，試驗中所產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小與該菌種在純培養(yǎng)狀態(tài)下產(chǎn)生的抑菌環(huán)大小存在較大的差異，影響判斷結(jié)果的準確性。因此需要對各種致病菌提純后，分別進行不同的藥敏試驗。藥敏試驗時，需要將提純后的菌種配制成一定濃度的菌液。WHO組織制定的標準是要求菌液濃度在1．5億／ml 左右。若菌液濃度過高，該菌會對所有藥物產(chǎn)生耐藥；反之，菌液濃度過低，該菌會對所有藥物均敏感。最jing確的方法是使用分光光度計測定新鮮培養(yǎng)物菌懸液的吸光度，來確定菌液濃度。國家細菌耐藥性監(jiān)測網(wǎng)的三級甲等醫(yī)院，其微生物實驗室大多數(shù)用此法來確定藥敏試驗的菌液濃度。

　　藥敏試驗中要將菌液均勻地涂在培養(yǎng)基上，使細菌均勻分布，這樣才能使試驗結(jié)果不會出現(xiàn)較大的偏差。涂菌后15min才能貼藥敏紙片。由于涂菌后，細菌要有一段時間的適應(yīng)過程，但是時間不能過長，否則會使細菌產(chǎn)生耐藥。貼藥敏紙片時，每取一種藥敏紙片必須燒一下鑷子口，避免藥敏紙片之間相互混淆，以提高藥敏的準確性。藥物殺滅細菌存在一定的量比，藥敏試驗培養(yǎng)基上細菌層越厚抑菌圈就越小，反之抑菌圈就越大。根據(jù)一種藥物抑菌圈的有無或者大小，只能判斷出該藥對細菌有沒有效果，但其敏感性的高低需要通過科學嚴謹?shù)膶嶒瀬泶_定。藥物的敏感程度需要根據(jù)藥敏試驗的結(jié)果，并結(jié)合以上因素做綜合分析，才能得出科學的結(jié)論，而片面地根據(jù)藥敏圈的大小來決定敏感與否，結(jié)果不夠準確。

　　綜上所述，因為上述原因，造成藥敏試驗的結(jié)果可能與實際效果不符，對藥敏試驗要具體情況進行相應(yīng)的分析，再根據(jù)藥物的代謝過程和原理綜合論證，藥敏試驗的指導意義還是很大的。而且上述因素并不非在我們臨床做藥敏試驗過程中都能遇到，因此，藥敏試驗仍然是指導臨床用藥的主要參考依據(jù)。對此，當前我們需要認真執(zhí)行標準化的試驗方法，認真執(zhí)行NCCLS質(zhì)控要求，做好室內(nèi)質(zhì)控與室間質(zhì)評，以提高試驗的準確性。嚴格控制藥敏試驗用培養(yǎng)基和藥敏紙片，做到保證質(zhì)量。加強細菌室的感染監(jiān)控職能和員工隊伍建設(shè)，及時提供醫(yī)院內(nèi)流行菌株及其耐藥率變遷信息。為合理使用抗菌藥物提供依據(jù)。加強培訓，配置先進的儀器設(shè)備并運用先進的技術(shù)將微生物檢驗推上一個新的臺階。