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標準的PCR三個過程
PCR全稱為聚合酶鏈式反應,是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術(shù)。標準的PCR過程分三步:變性--退火--延伸,PCR中會對這三步循環(huán)播放。
1、 DNA變性(90℃-96℃) 在開始準備變性的過程中,要慢慢加熱混合物,加熱混合物時,兩條鏈間氫鍵會融化,DNA兩股鏈會分開,就像上圖粉色的部分。如果混合物熱的情況下,引物不會和DNA黏在一起,兩條DNA鏈也不會黏在一起。
2、 退火(60℃-65℃) 接下來混合物慢慢的冷卻,這時引物會黏在DNA上,因為引物較小,更容易漂浮起來,和DNA結(jié)合。溫度控制在54攝氏度左右可以保證引物序列和DNA互補配對,而DNA雙鏈不會黏在一起。
3、延伸(70℃-75℃) 這一步我們需要一個幫助DNA復制的工具,即聚合酶鏈式反應中的聚合酶(polymerase)。下圖中綠色的圖形就代表著DNA聚合酶,所到之處萬物生,這也是我們身體各個細胞中用來復制DNA的工具。聚合酶的作用方式也非常生猛,直接找到部分單鏈,部分雙鏈的地方,咬住那里的序列開始進行復制。也就是說聚合酶會先找到引物,開始沿著引物進行缺失的序列填充。在一輪填充序列后,引物所在的鏈條(橙色鏈)會被補齊。這一步中會加入As, Cs, Gs和Ts這些DNA原材料,這樣可以把他們整合到新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈。這一步的溫度稍微高一些,大概是72攝氏度。最初我們加入的是雙鏈DNA,在一個周期后,我們會獲得四條鏈,兩個周期后獲得8條鏈,30個周期后,會獲得10億條DNA鏈。
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