細(xì)菌轉(zhuǎn)化操作步驟

細(xì)菌轉(zhuǎn)化原理：質(zhì)粒DNA粘附在細(xì)菌細(xì)胞表面，經(jīng)過42°C短時間的熱擊處理，促進(jìn)吸收DNA.然后在非選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)一代，待質(zhì)粒上所帶的抗菌素基因表達(dá)，就可以在含抗菌素的培養(yǎng)基中生長。

操作步驟:

（1）事先將恒溫水浴的溫度調(diào)到42℃。

（2）從-70℃ 超低溫冰柜中取出一管（100μl）感受態(tài)菌，立即用手指加溫融化后插入冰上，冰浴5~10min。

（3） 加入5μl連接好的質(zhì)?；旌弦海―NA含量不超過100ng），輕輕震蕩后放置冰上20min。

（4） 輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2min進(jìn)行熱休克，然后迅速放回冰中，靜置3~5min。

（5） 在超凈工作臺中向上述各管中分別加入500μl LB培養(yǎng)基（不含抗菌素）輕輕混勻，然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1h.

（6） 在超凈工作臺中取上述轉(zhuǎn)化混合液100~300μl，分別滴到含合適抗菌素的固體LB平板培養(yǎng)皿中，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻（注意：玻璃涂布棒上的酒精熄滅后稍等片刻，待其冷卻后再涂）。

（7） 如果載體和宿主菌適合藍(lán)白斑篩選的話，滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% X-gal，8μl 20% IPTG，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。

（8） 在涂好的培養(yǎng)皿上做上標(biāo)記，先放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中30-60min直到表面的液體都滲透到培養(yǎng)基里后，再倒置過來放入37℃恒溫培養(yǎng)箱過夜。

（9） 在被細(xì)菌污染的桌面上噴灑70%乙醇，擦干桌面，寫實驗報告。

（10）觀察平板上長出的菌落克隆，以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑。