微生物檢測消毒滅菌要求

   微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養(yǎng)基、被污染和接種的培養(yǎng)物等，必須經(jīng)滅菌后方能使用。

一、干熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法

1、滅菌前準備

(1)所有需要滅菌的物品首先應(yīng)清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴密，如用金屬筒應(yīng)將上面通氣孔打開。

(2)裝培養(yǎng)基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。

　2、裝放

(1)干熱滅菌器：裝放物品不可過擠，且不能接觸箱的四壁。

(2)大型高壓蒸氣鍋：：放置滅菌物品分別包扎好，直接放入消毒筒內(nèi)，物品之間不能過擠。

3、設(shè)備檢查

(1)檢查門的開關(guān)是否靈活，橡皮圈有無損壞，是否平整。

(2)檢查壓力表蒸氣排盡時是否停留在零位，關(guān)好門和蓋，通蒸氣或加熱后，觀察是式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應(yīng)按下列步驟進行：

①手提式高壓鍋在主體內(nèi)加入3L清水，立式高壓鍋加水16L(重復(fù)使用時應(yīng)將水量補足，水變混濁需更換).

②手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內(nèi)壁的方管中(無軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用)。

③蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器于火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，并打開頂蓋上的排氣閥放了冷氣(水沸騰后排氣10-15min)。

④關(guān)閉排氣閥，使蒸氣壓上升到規(guī)定要求，并維持規(guī)定時間(按滅菌物品性質(zhì)與有關(guān)情況而定)。

⑤達到規(guī)定時間后，對需干燥的物品，立即打開排氣閥排出蒸氣，待壓力恢復(fù)到零時，自然冷卻至60℃后開蓋取物，如為液體物品，不要打開排氣閥，而應(yīng)立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢復(fù)至零，溫度降到60℃以下再開蓋取物，以防突然減壓液體劇烈沸騰或容器爆破。

(3)臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按下列步驟進行：

①關(guān)緊鍋門，打開進氣閥，將蒸氣引入夾層進行預(yù)熱，夾層內(nèi)冷空氣經(jīng)阻氣器自動排出。

②夾層達到預(yù)定溫度后，打開鍋室進氣閥，將蒸氣引入鍋室，鍋室內(nèi)冷空氣經(jīng)鍋室阻氣器自動排出。

③待鍋室達到規(guī)定的壓力與溫度時，調(diào)節(jié)進氣閥，使保持恒定至

④自然或人工降溫至60℃再開門取物，不得使用快速排出蒸氣法，以防突然降壓，液體劇烈沸騰或容器爆破。

⑤使用自動程序控制式壓力蒸氣滅菌器，在放好物品關(guān)緊門后，應(yīng)根據(jù)物品類別按動相應(yīng)開關(guān)，以便按要求程序自動進行滅菌，滅菌時必須利用附設(shè)儀表記錄溫度與時間以備查，操作要求應(yīng)嚴格按照廠家說明書進行。

　4、滅菌溫度與時間

(1)干熱滅菌器滅菌溫度160℃，1.5-2h。

(2)壓力蒸氣滅菌鍋滅菌溫度與時間

　　二、間歇滅菌方法

1、滅菌方法系利用不加壓力的蒸氣滅菌，某些物質(zhì)經(jīng)高壓蒸氣滅菌容易破壞，可用此法滅菌。

(1)將欲滅菌物品置于鍋內(nèi)，蓋上頂蓋，打開排水口，使器內(nèi)余水排盡。

(2)關(guān)閉排水口，打開進氣門，根據(jù)需要消毒10～20min。

(3)滅菌完畢關(guān)閉進氣門，取出物品待冷至室溫溫度，放入37℃溫箱過夜，次日仍按上述方法消毒，如此三次，即可達到滅菌目的。

2、血清凝固器使用方法，培養(yǎng)基中含有血清或雞蛋特殊成份時，因高熱會破壞其營養(yǎng)成份，故用低溫，可使血清凝固，又可達到滅菌目的。

(1)在使用該法滅菌的血清等分裝時，需嚴格遵守無菌操作，試管、平皿也經(jīng)滅菌后使用。

(2)將培養(yǎng)基按要求使成斜面或高層，加足水后，接上電源，升溫75～90℃1h滅菌，放37℃溫箱過夜，再如此滅菌三次。

3、煮沸消毒：可用煮鍋或煮沸消毒器，水沸騰后再煮5～15min，也可在水中加入2%石炭酸煮沸5min，加入0.02%甲醛，80℃煮60min均可達到滅菌目的，但選用煮沸消毒的增消劑時，應(yīng)注意對物品的腐蝕性。

4、滅菌處理：滅菌后物品，按正常情況已屬無菌，從滅菌器中取出應(yīng)仔細檢查放置，以免再度污染。

(1)物品取出，隨即檢查包裝的完整性，若有破壞或棉塞脫掉，不可作為無菌物品使用。

(2)取出的物品，如為包裝有明顯的水浸者，不可作為無菌物品使用。

(3)培養(yǎng)基或試劑等，應(yīng)檢查是否符合達到滅菌后的色澤或狀態(tài)，未達到者應(yīng)廢棄。

(4)啟閉式容器，在取出時應(yīng)將篩孔關(guān)閉。

(5)取出的物品掉落在地或誤放不潔這處，或沾有水液，均視為受到污染，不可作為無菌物品使用。

(6)取出的合格滅菌物品，應(yīng)存放于貯藏室或防塵柜內(nèi)，嚴禁與未滅菌物品混放。

(7)凡屬合格物品，應(yīng)標有滅菌日期及有效期限。

(8)每批滅菌處理完成后，記錄滅菌品名、數(shù)量、溫度、時間、操作者。