逆轉(zhuǎn)錄酶共有的活性

不同的逆轉(zhuǎn)錄酶具有不同的功能活性，表現(xiàn)出不同的逆轉(zhuǎn)錄效率，如合成cDNA的長(zhǎng)度，產(chǎn)量，對(duì)復(fù)雜模板的適應(yīng)程度等。通常共有的活性如下：
1、RNA指導(dǎo)的DNA聚合酶活性：以RNA為模板，催化dNTP聚合形成DNA的過(guò)程。
2、RNaseH活性：在反應(yīng)過(guò)程中切割RNA：cDNA雜合鏈中的RNA模板。降低此活性，可避免在合成較長(zhǎng)cDNA之前模板RNA被降解掉。
3、DNA指導(dǎo)的DNA聚合酶活性：以反轉(zhuǎn)錄合成的第一條cDNA單鏈為模板，再合成第二條cDNA分子。
4、熱穩(wěn)定性：此性能是影響cDNA合成的重要因素。升高反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的溫度，有助于高GC或復(fù)雜二級(jí)結(jié)構(gòu)RNA模板的變性，實(shí)現(xiàn)全長(zhǎng)cDNA的合成。
5、保真性：RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA過(guò)程中的序列精確度。由于逆轉(zhuǎn)錄酶不具備3’-5’外切酶活性，因此沒(méi)有校正功能，所以合成的cDNA出錯(cuò)率較高。通常，除測(cè)序?qū)珳?zhǔn)度要求較高外，其他情況下，反轉(zhuǎn)錄中引入的錯(cuò)誤數(shù)量可忽略不計(jì)，因?yàn)閏DNA中的錯(cuò)誤不會(huì)被放大。
6、抗抑制能力：當(dāng)模板純度較低、抑制物較多時(shí)，抗抑制能力強(qiáng)的逆轉(zhuǎn)錄酶才能正常進(jìn)行cDNA的合成。
目前使用的逆轉(zhuǎn)錄酶大都為MMLV（來(lái)源于莫洛尼鼠白血病病毒）。未經(jīng)改造的MMLV最適反應(yīng)溫度為37℃，有較低的RNaseH活性。