pET-28a(+) Seamless Cloning Kit（線性化質(zhì)粒）

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號
pET-28a(+) Seamless Cloning Kit（線性化質(zhì)粒）	20 μl	BJ-PJ6547

商品介紹：

產(chǎn)品介紹：
pET-28a(+)載體為高水平的原核表達(dá)載體，在N端含有His-Tag, Thrombin（凝血酶）酶切位點(diǎn)，T7-Tag，在C端具有His-Tag。本產(chǎn)品提供pET-28a(+)經(jīng)EcoRⅠ酶切后的線性化載體，可用無縫克隆技術(shù)將單個或多個DNA片段組裝到載體上。
無縫克隆技術(shù)可在重組酶的作用下，只需一步反應(yīng)，便可將片段克隆到任何載體中的任意位置，得到重組質(zhì)粒。無縫克隆技術(shù)作為一種非常強(qiáng)大的克隆技術(shù)，具有快速、簡便、高效、多片段組裝和定向克隆等特點(diǎn)，用于單個 DNA 片段的克隆，多個 DNA 片段組裝克隆以及多位點(diǎn)突變構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?br style="box-sizing: border-box;" /> 產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. pET-28a載體為原核表達(dá)載體，具有N-His, N-Thrombin, N-T7和C-His。
2. pET-28a經(jīng)EcoRⅠ酶切后的線性化載體，省時省力。
3. 無縫克隆技術(shù)只需要簡單的 PCR 擴(kuò)增就可以制備片段DNA。
4. 可以克隆長片段和多片段DNA。
5. 簡單、快速、精確、定向克隆。
操作步驟：
1. pET-28a(+)線性化載體使用方法：
(1) pET-28a(+)線性化載體當(dāng)做克隆載體使用，可以在擴(kuò)增PCR產(chǎn)物的
上游引物 5’端添加序列：GCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATG（需要5’端HIS標(biāo)簽時）
或者AACTTTAAGAAGGAGATATACCATG（不需要5’端HIS標(biāo)簽時）
下游引物 5’端添加序列：CTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAG（需要3’端HIS標(biāo)簽時）
或者CTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAGTCA（不需要3’端HIS標(biāo)簽時）
通過無縫克隆連接到pET-28a(+)中。
(1) 測序引物
T7: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'
T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'
-2
pET-28a(+)線性化載體為 EcoRⅠ酶切后的線性化載體，圖譜及多克隆位點(diǎn)見下圖。