pET-32a(+) Seamless Cloning Kit（線性化質粒）

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號
pET-32a(+) Seamless Cloning Kit（線性化質粒）	20 μl	BJ-PJ6548

商品介紹：

產(chǎn)品介紹：
pET-32a(+)載體為高水平的原核表達載體，在N端含有TrxA(Trx-tag，硫氧還蛋白標簽)有利于蛋白的可溶性表達。pET-32a(+)在N端還含有His-Tag, Thrombin（凝血酶）酶切位點，S-Tag，Enterokinase(腸激酶)酶切位點，在C端具有His-Tag。本產(chǎn)品提供pET-32a(+)經(jīng)EcoRⅠ酶切后的線性化載體，可用無縫克隆技術將單個或多個DNA片段組裝到載體上。
無縫克隆技術可在重組酶的作用下，只需一步反應，便可將片段克隆到任何載體中的任意位置，得到重組質粒。無縫克隆技術作為一種非常強大的克隆技術，具有快速、簡便、高效、多片段組裝和定向克隆等特點，用于單個DNA片段的克隆，多個DNA片段組裝克隆以及多位點突變構建等實驗目的。
產(chǎn)品特點：
1. pET-32a(+)載體為原核表達載體，具有N-TrxA, N-His，N-Thrombin, N-S，N-Enterokinase和C-His。
2. pET-32a(+)經(jīng)EcoRⅠ酶切后的線性化載體，省時省力。
3. 無縫克隆技術只需要簡單的 PCR 擴增就可以制備片段DNA。
4. 可以克隆長片段和多片段DNA。
5. 簡單、快速、精確、定向克隆。
操作步驟：
1. pET-32a(+)線性化載體使用方法：
(1) pET-32a(+)線性化載體當做克隆載體使用，可以在擴增PCR產(chǎn)物的
上游引物 5’端添加序列：GTACCGACGACGACGACAAGGCCATG
下游引物 5’端添加序列：CTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAG
通過無縫克隆連接到pET-32a(+)中。
(2) 測序引物
PET-32A-SEQR: 5'-CTGGTTCTGGCCATATGCAC-3'
T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'
(3) pET-32a(+)線性化載體為 EcoRⅠ酶切后的線性化載體