HotStart Bst 4.2 SYBR Green Mix(可凍干)

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號
HotStart Bst 4.2 SYBR Green Mix(可凍干)	200Tx25μl	BJ-PJ6572

商品介紹：

描述：

本品為 LAMP 熒光檢測專用的試劑，2.5xBst4.2SYBR Green Mix 包含了 Helicaser、dNTP、Mg2+、SYBRGreen 染料、反應(yīng)緩沖鹽、凍干賦形劑和穩(wěn)定劑。HotStartBst4.2 DNA/RNA 聚合酶為單獨的組分。本品不僅可作為常規(guī)檢測試劑，對于具有凍干經(jīng)驗的研究者，本品還直接進(jìn)行后續(xù)凍干，無需再加入任何其它輔料。
Bst4.2 具有以下性能：
（1）Bst 4.2 全系包含熱啟動Aptamer，該配體確保酶在<30℃時，酶活封閉效率>95%,在>60℃時 1min 內(nèi)完全釋放酶活。該特性利于室溫建立反應(yīng)體系，并大幅降低了低溫條件下的非特異擴增；
（2）反應(yīng)溫度提升到 70℃，大幅降低引物 Dimer 的形成，提高擴增特異性，并使得粗樣品核酸釋放更加充分；
（3）全系包含 Helicaser，因此，允許在不使用 F3/B3 引物的情況下進(jìn)行 LAMP 擴增（easy LAMP），并允許 FIP/BIP 的引物用量降低一倍。這將進(jìn)一步降低非特異擴增，并使得擴增均一性大幅提升。

儲存：長期保存請置于-20℃以下（12 個月有效）；制品反復(fù)凍融10 次不影響性能，但應(yīng)避免反復(fù)凍融；制品由于含有高濃度的糖組分，-20℃保存的制品，在融化時可能會有結(jié)晶物。此時 2.5xBst4.2Mix 可在 37℃進(jìn)行徹底融化，而 Bst4.2 酶制品在 30℃的溫度下融化，過高的溫度可能會導(dǎo)致熱啟動性能下降。一經(jīng)融化推薦置于2-8℃保存，在此條件下制品穩(wěn)定儲存 6 個月。
特殊說明：
（1） Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 擴增時的推薦反應(yīng)溫度為 65-70℃，最佳反應(yīng)溫度為 70℃。因此其可完全替代 的 Bst4.0 系列，用于標(biāo)準(zhǔn) LAMP 的擴增。
（2） 由于 Helicaser 的反應(yīng)溫度為 70℃，因此在進(jìn)行 eLAMP 擴增時，反應(yīng)溫度為 70℃。
（3） 制品中包含高濃度的鹽組分，使用時做好個人防護(hù)，防止制品與皮膚、眼、鼻、呼吸道等接觸和吸入，一旦接觸或吸入，請用大量的清水沖洗。
（4）防止氣溶膠污染，盡可能進(jìn)行分區(qū)操作。
1. 標(biāo)準(zhǔn) LAMP 和 eLAMP 擴增的區(qū)別本試劑既可以用于標(biāo)準(zhǔn) LAMP 擴增，也可以用于 eLAMP擴增。
1.1 10x 標(biāo)準(zhǔn) LAMP Primer MixFIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4 μM each; F3/B3=2 μM each
1.2 10xeLAMP Primer Mix
FIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each
注意：eLAMP（easy LAMP）為去除 F3/B3 引物的方法，為 Bst4.2系列專用的使用策略，對于大多數(shù)引物組，在 Helicaser 的加持下，擴增速度幾乎不受影響。如引物擴增效率低，可提高 FIP/BIP 濃度到 12~16uM。
1.3 擴增溫度不同標(biāo)準(zhǔn) LAMP 擴增 eLAMP 擴增65-70°C 均可 70°C 反應(yīng)
2. 配制 LAMP 反應(yīng)體系2.5xBst4.2 SYBR Green Mix 10 μl
10x Primer Mix 2.5 μlHotStart Bst 4.2（8U/μl） 1 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl反應(yīng)體系配好后，置于 65-70°C 反應(yīng) 20~30min，1min 收集一次熒光信號。讀取擴增曲線進(jìn)行陰性和陽性判讀。
3. 試劑的凍干反應(yīng)（僅限專業(yè)人員）
本試劑可供具有凍干經(jīng)驗的人員直接進(jìn)行后續(xù)凍干，試劑的配方對凍干條件不苛刻。但對于不同的用戶來講，由于凍干形式、凍干體積、上機量、凍干容器、凍干磨具等因素存在差異，以下程序僅供參考。進(jìn)一步的程序優(yōu)化均需根據(jù)具體情況自行調(diào)整。對于非專業(yè)人員來講，請直接采購  的凍干制品，或委托訂制。
2.5xBst4.2 SYBR Green Mix 10 μl
25xPrimer Mix 1 μl
HotStart Bst 4.2（8U/μl） 1 μl
Total 12 μl
制品成型后的凍干程序：
-50℃預(yù)凍 10min； -50℃ 4-8h（真空段）；-50℃升溫到 25℃（每小時升溫 5℃）；25℃ 2h； 25℃恒溫。