Golden MLV Reverse Transcriptase（200U/ul）

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號(hào)
Golden MLV Reverse Transcriptase（200U/ul）	20KU	BJ-PJ6604

商品介紹：

描 述 ：

Golden MLV Reverse Transcriptase 反轉(zhuǎn)錄 酶是在鼠源病毒反轉(zhuǎn)錄酶基礎(chǔ)上進(jìn)行定點(diǎn)突變改良而得。該 酶去除了 RNase H 活性中，從而避免反轉(zhuǎn)錄過程中降解 RNA。同時(shí)經(jīng)過突變文庫(kù)篩選，使得其熱穩(wěn)定性更強(qiáng)，可耐 受 55℃高溫反應(yīng)（最佳活性溫度為 50℃）。相比于低溫條件 下反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，采用高溫反轉(zhuǎn)錄可顯著打開 RNA 二級(jí)結(jié)構(gòu)， 從而提高復(fù)雜 RNA 模板的擴(kuò)增性能、提高反轉(zhuǎn)錄 cDNA 的 長(zhǎng)度和產(chǎn)量，從而提高后續(xù)檢測(cè)的靈敏度。 

單位定義：以 poly(rA)為模板、oligo(dT)為引物，在 37°C條件下，10 分鐘內(nèi)催化 1 nmol 的 dTTP 摻入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定義為一個(gè)活性單位。
酶儲(chǔ)存液：20mM Tris-HCl,pH7.5, 150mM NaCl, 0.1%Tween20, 2mM DTT, 50%甘油。
儲(chǔ)存：-20°C 可保存 3 年。

操作方法
1. 按以下組分配制反應(yīng)體系
Golden MLV Reverse Transcriptase 1 μl
10×RT Buffer 2 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 1 μl
Total RNA or Poly(A) RNA 0.1-2 μg
20×Oligo dT(25)&Random Primer * 1 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 0.2 μl
RNase Free H2O Up to 20 μl
*注：Oligo dT(25) 使用濃度為 20~50 μM, 如使用 Random9隨機(jī)引物可使用 125 μM，基因特異性引物可使用 5 μM。
2．在 PCR 儀上按下列條件進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)
 30°C 5 min
 *37-50°C 15~30 min
 85°C 5 min
*推薦的反轉(zhuǎn)錄溫度設(shè)置為 50°C，無論是高 GC 或長(zhǎng)片段模板，均可獲得綜合性的 cDNA 產(chǎn)量。
3. 反轉(zhuǎn)錄所得的 cDNA 可直接用于 PCR 反應(yīng)或儲(chǔ)存于-20°C。
4. 其它注意事項(xiàng)：該酶可與 Taq DNA 聚合酶組合，用于One-Step RT-PCR，推薦的 RT 溫度為 50°C，RT 時(shí)間為5min，酶的參考用量為：終反應(yīng)濃度 0.5-2U/ul。