Dnase I(Rnase free)

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號(hào)
Dnase I(Rnase free)	1000U	BJ-PJ6678

商品介紹：

描述：

該酶是將單鏈或雙鏈 DNA 同等程度的隨機(jī)分解，生成具有 5′-P 末端寡核苷酸的脫氧核糖核酸內(nèi)切酶。由于RNase-free DNase I 中 Protease 已幾乎被完全去除，從而提高了該酶在 pH 中性區(qū)域的穩(wěn)定性。此外該酶中添加了
Rnase Inhibitor，用于抑制 RNA 樣品中殘留的 RNase 核酸酶，因此可以有效抑制 RNA 提取過程中 Rnase 酶對(duì) RNA的降解。Stop Buffer 終止反應(yīng)后，可通過一步加熱失活DNase I 活性。

活性定義
在 50 μl 體系下，37℃ 10min 條件下完全消化 1 μg pBR322質(zhì)粒 DNA 所需的酶量定義為 1 個(gè)活性單位。純度
2 U 的本酶和 1 μg 的 16S, 23S rRNA 在 37℃、pH7.5 的條件下反應(yīng) 1 小時(shí)，RNA 的電泳譜帶不發(fā)生變化
應(yīng)用：去除 RNA 樣品中的 DNA 污染。
儲(chǔ)存：-20°C 可保存 2 年。
操作方法（去除 RNA 中的基因組 DNA 污染）
1. 按以下組分配制反應(yīng)體系
RNA 1~50 μg
10× RD Buffer 2 μl
Rnase Free DNase I (2 U/μl) 1 μl*
Rnase Free H2O Up to 20 μl
*若 RNA 樣品中含有超過 5 μg 基因組 DNA 污染，請(qǐng)使用2 μl 該酶。
2. 37°C 孵育 15min 以消化去除基因組 DNA。
3. 孵育完畢后加入 2 μl 10× RD Stop Buffer，混合均勻室溫放置 1min，并置于 75°C 10min 加熱失活 DNase I。樣品可直接用于下一步反轉(zhuǎn)錄等試驗(yàn)。
注意：
1）通常加熱方法即可失活 DNase I。如需要去除殘留的變性蛋白，可在 37°C 消化完畢后使用酚氯仿抽提并沉淀 RNA樣品（不進(jìn)行加熱操作）。
2）10× RD Stop Buffer 中含有螯合劑用于去除二價(jià)陽離子，進(jìn)行加熱失活前，必須加入 2 μl 10× RD Stop Buffer 并混合均勻，再進(jìn)行熱失活，否則會(huì)導(dǎo)致 RNA 降解。
3）處理完畢的 RNA 樣品進(jìn)行一步反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)，添加量需要<20%（如 20 μl 的反轉(zhuǎn)錄體系中加入量要<4 μl）