Extreme Thermostable Rnase HII（極耐熱Rnase HII）

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號
Extreme Thermostable Rnase HII（極耐熱Rnase HII）	200U	BJ-PJ6692

商品介紹：

描述：

該 RNase H2 是來源于極端耐熱的菌株的內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶，它識別 RNA/DNA 雜交鏈并切割 RNA 鏈，其對單鏈 RNA 切割活性極低，且對 dsDNA、ssDNA 無切割活性。該酶在 DNA/RNA duplex 的單核糖核苷酸殘基
處從 5’端進(jìn)行切割，切割后產(chǎn)生一個 5′端磷酸基團(tuán)和一個3′端羥基。該 RNase H2 酶在 60-70°C 具有最佳活性，在 50°C 到 75°C 間均具有活性，但其在室溫下活性非常低。該酶極度耐熱，在 95°C 加熱 30min 后仍保留全部活性，因此其與大多數(shù)的 PCR 緩沖體系兼容，可用于 RnaseHII 依賴性 PCR（rhPCR）等實驗。

儲存：-20°C 可保存 2 年。
單位定義：一個單位是指在 60°C 下，15 分鐘切割 1nmol含有單個 RNA 的嵌合 DNA/RNA 雜交雙鏈體底物所需的酶量。
本品為高濃度制品：使用時通常需要先用 15%甘油稀釋到 2U/μl 后使用。
10XET RNase H2 Buffer: 200mM Tris-HCl, 500mM KCl,1% Tween20, 200ug/ml BSA, 50mM Mg2+, pH8.5.
使用方法（一）
DNA/RNA 雜交鏈 10-200pmol
10XET RNase H2 Buffer 2 μl
ET RNase H2 (2U/μl) 0.5 μl
ddH2O Up to 20 μl
50-70°C 反應(yīng) 15min。
使用方法（二）-rhPCR 擴(kuò)增
10XPCR Buffer 2 μl
10μM Blocked PrimerF 0.4 μl
10μM Blocked PrimerR 0.4 μl
Taq DNA Polymerase 0.5Unit
ET RNase H2 (2U/μl) 0.5 μl
DNA 模板 1 μl
ddH2O Up to 20 μl
反應(yīng)：95°C 1min，循環(huán) 45 次（95°C 10s，60°C 30s）。
注意事項
1. 該酶在 50-75℃均有活性，其用量可根據(jù)不同的應(yīng)用進(jìn)行調(diào)節(jié)，該酶在室溫 25 度情況下活性極低。
2.該酶用于 rhPCR（依賴于 Rnase H2 的 PCR ）時，需要使用 3′ 端帶封閉基團(tuán)的 DNA 引物（Blocked 引物）。引物 3’端可以采用 C3 Spacer 或 NH2 封閉，3’末端第 5位為單堿基的 RNA 堿基。
3. 該酶與絕大多數(shù)的 PCR 緩沖體系兼容，最佳 mg2+濃度 2~3mM。
4. 該酶極其耐熱，95℃30min 活性無顯著降低，故不可通過熱失活，0.1% SDS 可將其失活。
5. 在 rhPCR 中推薦的使用濃度為 10~50mU/μl。