全血 / 組織 / 細(xì)胞基因組 DNA 快速提取試劑盒

商品屬性：

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	貨號
全血 / 組織 / 細(xì)胞基因組 DNA 快速提取試劑盒	100 次	BJ-PJ6352
全血 / 組織 / 細(xì)胞基因組 DNA 快速提取試劑盒	100 次×2	BJ-PJ6352

商品介紹：

保存條件：本試劑盒在室溫儲(chǔ)存 12 個(gè)月不影響使用效果。RNase A 建議-20℃長期保 存。
產(chǎn)品介紹：
獨(dú)特的結(jié)合液/蛋白酶 K 迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶，然后基因組 DNA 在 高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜，再通過一系列快速的漂洗－離心的 步驟，抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除，最后低鹽的洗脫緩沖 液將純凈基因組 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1.重復(fù)性好:離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.提取純度高，OD260/OD280 典型的比值達(dá) 1.7～1.9，可直接用于 PCR，Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。
3.簡單快速，一小時(shí)內(nèi)即可獲得超純的基因組 DNA。
4.廣泛:適用于血液、多種動(dòng)物細(xì)胞和動(dòng)物組織等。
注意事項(xiàng)：
1.結(jié)合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在 37℃水浴幾分 鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

 2.避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化。
 3.結(jié)合液 CB 和抑制物去除液 IR 中含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

4.洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫， 但應(yīng)該確保批 pH 大于 7.5，pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫 DNA 應(yīng)該保存在-20℃。 DNA 如果需要長期保存，可以用 TE 緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是 EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。
自備試劑：無水乙醇
操作步驟：
提示：第一次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指定量無水乙醇，充分混勻，加入后請及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
如果需要去除 RNA，可在加蛋白酶 K 溶液前先加入 4μl RNaseA（10mg/ml）溶液振蕩 15sec，室溫放置 5 min1.處理材料
a. 血液
如提取材料為血液，可直接使用220μl新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，不足220µl用緩沖液BB補(bǔ)足220µl，振蕩混勻后，直接進(jìn)行下一步驟。
注意：如需處理更大體積血液，如300μl-1ml，應(yīng)按以下步驟操作：在樣品中加入3倍體積紅細(xì)胞裂解液（例如，300μl血液加入900μl紅細(xì)胞裂解液），顛倒混勻，室溫放置5 min，期間再顛倒混勻幾次。10,000rpm離心1min（若離心機(jī)最高轉(zhuǎn)速不允許，也可3000rpm離心5min，吸去上清，留下白細(xì)胞沉淀，加220μl緩沖液BB，振蕩至徹底混勻。10×紅細(xì)胞裂解液(SH406-01)本公司另外有售，可根據(jù)需要來決定購買。（10× 紅細(xì)胞裂解液使用ddH2O稀釋成1×使用。）
b. 禽類等血液
如果處理血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級生物的抗凝血液，其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞，因此處理量 5-20μl，可加緩沖液 BB 補(bǔ)足 220μl 后進(jìn)行下面的步驟。

c. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞
貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液，然后 10,000rpm 離心 1min，棄上清，加 220μl緩沖液 BB，振蕩至徹底懸浮；
d. 動(dòng)物組織取 20-50mg 動(dòng)物組織在液氮中研磨成細(xì)粉，或用解剖刀切成微小碎塊后，轉(zhuǎn)入離心管中，加入 180μl 裂解液 TL 后，渦旋振蕩混勻。
2.提取基因組DNA時(shí)為清除RNA，加入5µl RNase A（10mg/ml），振蕩混勻，室溫放置5 min。
3.加入20µl蛋白酶K，振蕩混勻，置于55℃水浴中消化處理。
a. 提取血液基因組時(shí)，只需加入蛋白酶K混勻，即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。
b. 提取細(xì)胞基因組時(shí)，只需加入蛋白酶K混勻，即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。
c. 提取組織基因組時(shí)，加入蛋白酶K混勻后，在55℃放置，直至組織溶解，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠，再進(jìn)行下一步驟。
注意：不同組織裂解時(shí)間不同，通常需1-3 h即可完成（鼠尾需要消化過夜），不會(huì)影響后續(xù)操作。每小時(shí)顛倒混合樣品2-3次，用水浴振蕩器也可。
4.加入220μl結(jié)合液CB并充分混勻后，置于70℃水浴10 min，等溶液變清亮，12,000rpm 短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
注意：加入結(jié)合液CB時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃放置時(shí)會(huì)消失，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說明細(xì)胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA不純。當(dāng)血液體積≤200μl且沒有采用紅細(xì)胞裂解處理，或是樣本儲(chǔ)存條件不佳，水浴后顏色可能為深褐色，注意溶液中沒有團(tuán)塊等沉淀。
5.加入220µl的無水乙醇，充分振蕩混勻15sec，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
6.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中12,000rpm 離心30sec，倒掉廢液，將吸附柱AC放回收集管中。
7.加入500µl抑制物去除劑IR，12,000rpm離心1min。倒掉收集管中的濾液。并將離心柱放回收集管中。
8.加入500µl漂洗液WB，12,000rpm離心30sec。（使用前請檢查是否已經(jīng)加入無水乙醇）倒掉收集管中的濾液。并將離心柱放回收集管中。
9.重復(fù)步驟8的操作。
10.將吸附柱AC柱放回收集管中，12,000rpm離心2min，倒掉廢液。將AC吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實(shí)驗(yàn)。
11.在吸附膜的中間部位加 50-100μl 洗脫緩沖液 EB（洗脫緩沖液事先在 65℃水浴中預(yù)熱效果更好），室溫放置 2-5min，12,000 rpm 離心 1min。為了提高基因組 DNA 的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱中，室溫放置 2-5min，12,000rpm 離心 1min。
注意：DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。