ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)本收集全方面闡述

ELISA進(jìn)行檢測(cè)的樣本類型包括常見的血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰道分泌物等，這些樣本收集的時(shí)間、處理方法和保存都會(huì)影響到ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。做ELISA實(shí)驗(yàn)，在處理樣本前應(yīng)該先了解收集樣本的注意事項(xiàng)。

　一、標(biāo)本收集注意事項(xiàng)：
　1.收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。

　2.血清和血漿避免使用溶血，高血脂標(biāo)本。

　3.標(biāo)本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。

　4.標(biāo)本收集后若不及時(shí)檢測(cè)，需按一次使用量分裝，凍存于-20℃，-80℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融。

　5.可根據(jù)標(biāo)本的實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù)) 。

　6.收集標(biāo)本，盡量做到雙份的用量，避免一次實(shí)驗(yàn)失敗，重復(fù)實(shí)驗(yàn)時(shí)標(biāo)本缺失，從而耽誤實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。

　7.收集標(biāo)本時(shí)，應(yīng)該做好防護(hù)措施(比如戴手套，口罩，護(hù)目鏡等)，認(rèn)為所有標(biāo)本都具有一定的潛在危險(xiǎn)性。

    8.樣本處理應(yīng)該在生物安全柜里面，并且正確使用生物安全柜。

　　二、標(biāo)本處理辦法：

　　1.血清：將采集的全血靜置冰箱4℃過夜，然后1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。

　　2.血漿：用EDTA，枸櫞酸鈉，肝素等作為抗凝劑，加入血液混勻后，1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。
 

　　3.組織勻漿：切取組織塊，0.01MPBS中過洗一次；按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例，在冰水中勻漿。勻漿完成后，5000-10000rpm離心10分鐘，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。
 

　　4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃(3-6個(gè)月)保存。
 

　　5.尿液，腹水，腦脊液等：1000-3000rpm離心10分鐘，取上清立即測(cè)試，暫時(shí)不測(cè)可以放入-20℃(1-3個(gè)月)或-80℃3-6個(gè)月)保存。

　　注：樣品稀釋的一般原則
 

　　ELISA實(shí)驗(yàn)加樣時(shí)可能遇到的問題：
 

　　1、過長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))。
 

　　2、手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間。

　　3、加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外，血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。
 

　　ELISA實(shí)驗(yàn)相應(yīng)解決辦法：

　　1、標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘。

　　2、標(biāo)本為血漿：須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘。

　　3、若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。

　　4、加樣后及時(shí)放入孵箱。

　　5、加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。

　　6、如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。

　　7、標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。