介紹pc12細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟

 PC12細(xì)胞是大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻瘤分化細(xì)胞株，具神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的一般特征，因其具可傳代特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于神經(jīng)生理和神經(jīng)藥理學(xué)研究。

1. PC12細(xì)胞有兩種：未分化型和分化型。其中未分化型的PC12細(xì)胞貼壁能力強(qiáng)，傳代時(shí)需要胰酶消化，形狀不規(guī)則。分化型PC12細(xì)胞傳代時(shí)不需要胰酶，直接可以吹下來，形狀規(guī)則。這兩種細(xì)胞沒有很大的區(qū)別，但我在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，未分化型的PC12細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性較之分化型的要差一些。

2. 由于PC12細(xì)胞是一種腫瘤細(xì)胞，在傳代次數(shù)較多后，它的形狀和性狀會(huì)發(fā)生改變。這些改變尤見于未分化型PC12細(xì)胞。主要是細(xì)胞形狀變得geng加不規(guī)則，對(duì)藥物的敏感性愈加下降。因此，建議長(zhǎng)期用PC12細(xì)胞作實(shí)驗(yàn)的戰(zhàn)友-好嚴(yán)格控制細(xì)胞的傳代次數(shù)。

3.在復(fù)蘇細(xì)胞時(shí)動(dòng)作一定要迅速，放入溫水中1～2min后要馬上加入培養(yǎng)液中，培養(yǎng)12～24小時(shí)后geng換一次培養(yǎng)液，這樣不僅可以把DMSO吸掉，而且可以將死亡的細(xì)胞也吸掉。細(xì)胞一天一看即可，經(jīng)常動(dòng)會(huì)有影響。注意過濾后血清的PH值，因?yàn)榕囵B(yǎng)液過濾后PH值會(huì)有所改變。復(fù)蘇后的換液時(shí)間取決于您復(fù)蘇時(shí)是否洗滌離心細(xì)胞，去除了凍存液中的DMSO，如果沒有去除DMSO，細(xì)胞培養(yǎng)過夜后就要徹底換液；如果復(fù)蘇時(shí)洗滌離心過，可以待傳代時(shí)再換液也可。（據(jù)我個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，還是復(fù)蘇時(shí)去除DMSO，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)好一些）

4. 狀態(tài)良好的細(xì)胞復(fù)蘇后 4 h即可貼壁，開始增殖，大約2 d即可傳代，接種48h應(yīng)該到了對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期。

5. 每天觀察一兩次細(xì)胞我不認(rèn)為會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)造成不良影響，不過每次觀察的時(shí)間不易過長(zhǎng)。

6. 傳代時(shí)我認(rèn)為-好不要用胰蛋白酶，因?yàn)橐鹊鞍酌笇?duì)細(xì)胞有破壞作用。我以前用胰蛋白酶消化傳代過PC12, 結(jié)果傳代后的細(xì)胞雖然貼壁，形態(tài)也好，但就是增殖緩慢，所以我現(xiàn)在都是用槍吸取培養(yǎng)液直接吹打，傳代后細(xì)胞增殖迅速，2 d就長(zhǎng)滿了（因?yàn)殚L(zhǎng)的太快，我只好降低血清濃度，用5%FBS）

7. 傳代的時(shí)機(jī)-好選在細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，占瓶底70%－80%時(shí)-好，如果細(xì)胞長(zhǎng)的太滿，細(xì)胞的狀態(tài)會(huì)越來越差，zui后大片死亡；這種細(xì)胞傳代后生長(zhǎng)也不好；而且長(zhǎng)的太滿后，細(xì)胞貼壁牢，難于吹起來，相反，70%－80%時(shí)細(xì)胞很容易吹起來。

8. 如果細(xì)胞貼壁太緊，不得不用胰蛋白酶消化，注意低濃度，段時(shí)間，多洗滌。我一般用0.025％的胰蛋白酶，在鏡下觀察細(xì)胞突起收縮，有零星的細(xì)胞漂起就中止，或用肉眼觀察，瓶底呈現(xiàn)薄霧狀的模糊感時(shí)就中止，中止一定要徹底，要用含血清的培養(yǎng)液多洗滌離心幾次，確保去除剩余的胰蛋白酶，否則傳代后的細(xì)胞難以生長(zhǎng)。

9. 就培養(yǎng)器皿的選用，我推薦在60mm的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)傳代，第1，在皿里細(xì)胞生長(zhǎng)的geng快，我想可能是皿比瓶的氣體交換geng好吧；第二，傳代時(shí)吹打geng方便，不易污染。