免疫熒光技術(shù)鑒定過(guò)程

 為了更好的幫助客戶提供真實(shí)的原代細(xì)胞，使用免疫熒光鑒定出提取的細(xì)胞類(lèi)型，免疫熒光技術(shù)又稱(chēng)熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。

該技術(shù)的主要特點(diǎn)是：特異性強(qiáng)、敏感性高、速度快。供參考：

1、細(xì)胞爬片

取4片玻璃片于24孔板中，每孔加入培養(yǎng)基1mL，加入細(xì)胞0.02million個(gè)/孔。置培養(yǎng)箱2h或過(guò)夜。
2、固定
細(xì)胞爬片后，吸出培養(yǎng)基，用PBS洗一遍，加入4% PFA于4℃固定30min。用PBS洗3×5min/次。也可最后一次不吸出PBS，放4℃過(guò)夜。
3、破膜封閉
將玻片除去水分，置于培養(yǎng)皿支撐物上，
玻璃片封閉液配置：0.5% Trition X-100與PBS 1:1混合，再加10% 血清，
取50uL破膜封閉液滴于防水膜上，將玻片上有細(xì)胞的一面蓋上2h。
4、一抗孵育
一抗配置：抗體與PBS 1:100（200）稀釋
破膜后，取50uL一抗于防水膜上（濕盒中），將玻片有細(xì)胞的一面蓋上置于4℃（最多可放置一周）
陰性對(duì)照組可用PBS代替一抗。
5、二抗孵育
PBS洗3×5min/次，
二抗混合液配置：二抗：PBS=1:500
DAPI:PBS=1:1000
防水膜上滴50uL二抗混合液，蓋上玻片，避光，室溫放置2h。
6、包埋

PBS洗3×5min/次，玻片上各滴1滴Fluoromount-G，將有細(xì)胞的一面蓋上。