ELISA實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)復(fù)測(cè)影響因素分析

在ELISA實(shí)驗(yàn)過(guò)程中時(shí)常會(huì)出現(xiàn)復(fù)測(cè)現(xiàn)象，即我們時(shí)常說(shuō)的"花板"現(xiàn)象，這種現(xiàn)象影響檢驗(yàn)結(jié)果的正確判讀，對(duì)工作造成一定的不利影響，一旦出現(xiàn)“花板”，實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須放棄，重新進(jìn)行，不僅浪費(fèi)物料和時(shí)間，而且還會(huì)出現(xiàn)樣本量缺少、交叉污染、報(bào)告延遲等一系列問(wèn)題。
出現(xiàn)這現(xiàn)象的影響因素分析如下：
1、標(biāo)本因素
正確處理標(biāo)本，防止大規(guī)模溶血、血漿層異物、使用一次性加樣槍頭，防止交叉污染。血清和血漿均可以用于檢測(cè)，但血清的分離應(yīng)在抽血后等血液完全凝固后再離心。

2、試劑因素
正確保存及使用有效試劑。使用過(guò)期試劑及底物接觸金屬容器、底物混合后放置時(shí)間較長(zhǎng)均影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。選擇試劑時(shí)應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好，批間差小的試劑。不同廠家的試劑不能混用，包括底物和洗滌液。檢測(cè)前應(yīng)將試劑放置室溫平衡半小時(shí)，洗滌液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，同時(shí)觀察濃縮洗滌液中有無(wú)結(jié)晶，若有結(jié)晶應(yīng)放37℃水浴中融化后才可使用。3、技術(shù)人員操作因素
嚴(yán)格按照相關(guān)實(shí)驗(yàn)SOP操作實(shí)驗(yàn)。加樣時(shí)應(yīng)盡可能的垂直加樣，并加在包被孔的底部（注：勿應(yīng)用力過(guò)度破壞底部包被物質(zhì)），不可加在孔的上部及外部。4、溫浴的因素
使用水浴箱作為溫浴設(shè)備時(shí)，應(yīng)注意水的深淺對(duì)結(jié)果的影響，當(dāng)水浴箱中水的的實(shí)測(cè)溫度37℃時(shí)，則水面溫度可能只有34℃，空氣溫度更低，甚至只有二十多度，所以當(dāng)水浴箱中水位過(guò)低時(shí)則酶標(biāo)微孔板沒(méi)有浸入水中，則反應(yīng)溫度會(huì)達(dá)不到37℃，相應(yīng)的就會(huì)影響酶促反應(yīng)。為防止邊緣效應(yīng)，酶標(biāo)板應(yīng)盡量浸入水中，以保證受熱的均勻。水浴時(shí)，酶標(biāo)板應(yīng)封好，以免水滴滴入包被孔中，或陽(yáng)性標(biāo)本的蒸發(fā)。嚴(yán)格掌握溫浴時(shí)間，不可為了早點(diǎn)出結(jié)果擅自縮短溫浴時(shí)間。5、洗板機(jī)的因素
廢液瓶裝滿后應(yīng)及時(shí)清空，以防止廢液回流對(duì)管道的污染，而使洗滌不徹底，造成“花板”。洗板結(jié)束后應(yīng)用蒸餾水徹底清洗管道，以防止廢液在管道中的殘留。同時(shí)應(yīng)根據(jù)儀器維護(hù)保養(yǎng)程序，定期對(duì)洗板機(jī)進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)。6、酶標(biāo)儀
酶標(biāo)儀應(yīng)安置在避光條件下，比色前應(yīng)提前15-30分鐘開(kāi)機(jī)預(yù)熱，這樣測(cè)定結(jié)果會(huì)更穩(wěn)定。為防止顯色的加深或減弱，顯色時(shí)間完成后應(yīng)立即滴加終止液（避免氣泡產(chǎn)生），并在10分鐘內(nèi)完成比色。酶標(biāo)板從水浴箱取出后應(yīng)擦凈孔底水滴，若有水滴或紙屑?xì)埩粼诳椎祝瑫?huì)造成酶標(biāo)儀讀數(shù)錯(cuò)誤，誤判定為“花板”。