探討有關ELISA試驗洗板

     洗板目的在于將特異性結(jié)合于固相上的抗原(抗體)與溫育過程中吸附的非特異性成份分離，使免疫復合物與待測抗體(抗原)呈一定比例，洗板是否合格直接影響檢測結(jié)果的準確性。

     洗板應嚴格按照說明控制洗板時間及洗板次數(shù)， ELISA 檢測一般用洗滌液洗板 3 次，洗滌液應嚴格按照操作說明進行稀釋，洗液應注滿每個微孔并注意洗液不外溢，垂直甩板避免交叉污染，防止出現(xiàn)假陰性及假陽性結(jié)果。使用洗板機洗板可一定程度上避免環(huán)境污染、提高工作效率，洗滌開始時注意觀察每根吸液針是否一直插入孔底并吸干孔內(nèi)全部液體，嚴格按照要求設置一定的洗板時間及洗板次數(shù)。

    洗板過程中注意沖力大小，避免沖力過大導致酶結(jié)合物丟失，吸光度值偏低。洗液應根據(jù)不同廠家的酶標板調(diào)整注水量，注意不要溢出孔外；稀釋洗液所用的蒸餾水或去離子水酸堿度適中，使配出的洗液 pH 在 7.2~7.6 范圍內(nèi)，用非金屬容器保存，保持液體新鮮無污染、沉淀。洗板結(jié)束后將板拍干，應垂直扣在備好的干凈的吸水紙或毛巾上，且注意每次更新干凈的吸水紙或毛巾。

洗板時還應注意以下問題：

1、 需每天校正注液量及殘液量，洗滌后殘液量不得大于 2μl；

2、及時更換破損吸液針，避免破壞底板包被；

3、針對不同廠家酶標板注意調(diào)整吸液頭下降高度，避免沖洗針頭卡住酶標板；

4、注意調(diào)整洗液量，洗液量過多將溢出，過少將達不到洗滌效果；

5、關機前使用蒸餾水沖洗管道，避免洗液的結(jié)晶物堵塞管道；

6、不同種試劑盒的洗液嚴禁混合使用。臨床操作中，工作人員由于擔心洗板次數(shù)過少達不到去除非特異性物質(zhì)的理想效果而增加洗板次數(shù)，最近研究發(fā)現(xiàn)，隨著洗板次數(shù)的增加樣本檢測的 OD 值降低，造成假陰性結(jié)果及灰區(qū)標本的漏檢。