酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)基本原理及特點(diǎn)概述

  1971年瑞典學(xué)者Engvail和Perlmann,荷蘭學(xué)者Van Weerman和Schuurs分別報(bào)道將免疫技術(shù)發(fā)展為檢測(cè)體液中微量物質(zhì)的固相免疫測(cè)定方法，即酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法 (enzyme-linked immuno sorbent assay , ELISA) 。ELISA已成為分析化學(xué)領(lǐng)域中的前沿課題 ，它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術(shù)( immunoenzymatic techniques ) 的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新型的免疫測(cè)定技術(shù) 。

一、基本原理

它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物與酶連接，然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測(cè)定。測(cè)定的對(duì)象可以是抗體也可以是抗原。

在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑:

①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑)

②酶標(biāo)記的抗原或抗體(標(biāo)記物)

③酶作用的底物(顯色劑)

測(cè)量時(shí)，抗原(抗體)先結(jié)合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加一種抗體(抗原)與酶結(jié)合成的偶聯(lián)物(標(biāo)記物)，此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性，當(dāng)偶聯(lián)物與固相載體上的抗原(抗體)反應(yīng)結(jié)合后，再加上酶的相應(yīng)底物，即起催化水解或氧化還原反應(yīng)而呈顏色。

其所生成的顏色深淺與欲測(cè)的抗原(抗體)含量成正比。 這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學(xué)顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計(jì)(酶標(biāo)儀)加以測(cè)定。其方法簡(jiǎn)單，方便迅速，特異性強(qiáng)。

二、分類

該法由種類和變化可分為以下幾種:

(一)雙抗體夾心法

(二)間接法

(三)競(jìng)爭(zhēng)法

(四)雙位點(diǎn)一步法

(五)捕獲法測(cè)IgM抗體

(六)應(yīng)用親和素和生物素的ELISA

三、特點(diǎn)

該法相較其他方法而言，有幾大特點(diǎn)

1. 靈敏性高

該測(cè)定法的靈敏度來自作為報(bào)告基團(tuán)的酶。酶是一種有機(jī)催化劑，很少量的酶即可誘導(dǎo)大量的催化反應(yīng) ，產(chǎn)生可供觀察的顯色反應(yīng)現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。ELISA實(shí)現(xiàn)了在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位，或在微克、甚至納克水平上對(duì)其進(jìn)行定量。

2. 特異性強(qiáng)

其特異性來自抗體或抗原的選擇性?？乖贵w的結(jié)合實(shí)質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)之間。由于兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)和空間構(gòu)型上呈互補(bǔ)關(guān)系，所以抗原抗體反應(yīng)具有高度的特異性。