凍存原代細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程

       原代細(xì)胞(primary cell)是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞，稱為原代細(xì)胞。即原代細(xì)胞是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。一般認(rèn)為，培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。凍存原代細(xì)胞的培養(yǎng)：

1.將一管細(xì)胞從液氮罐中取出，注意保護(hù)手和眼睛。

2.將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體*融化。

3.將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無(wú)菌環(huán)境。

4.用70%的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。

5.打開(kāi)蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋(注意，由于凍存管有負(fù)壓，開(kāi)蓋時(shí)可能會(huì)有少量溢出，這是正常現(xiàn)象)。

6.用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細(xì)胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個(gè)細(xì)胞。

7.蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開(kāi)蓋子。

8.將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中。

　　9.放入培養(yǎng)箱后第6-16小時(shí)更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。